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黄鳝雌激素受体α基因、编码蛋白及酶联免疫检测方法
2017-03-23 18:09:37  来源:

本发明采用RT-PCR方法获得黄鳝性腺中ERα序列,选择其抗原性较强的氨基酸序列相对应的cDNA序列作为模板克隆到长约945bp的序列,并将其克隆到pMAL-c2x表达载体中,通过IPTG诱导,Amylose-sepharose柱的纯化,获得了较纯的具有免疫活性的重组蛋白,采用Factor Xa蛋白酶切、进一步纯化后,获得了可作为免疫原的ERα表达蛋白。免疫小鼠后,获得较高滴度的抗血清,并初步进行了免疫组化研究,表明该抗血清能特异与黄鳝性腺中的ERα蛋白结合,在卵母细胞膜上呈阳性反应,为进一步研究黄鳝性别发展中雌激素及其ERα等作用打下了基础。本发明还以此抗体为基础制备了ELISA检测试剂盒。

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